Caracterização fenotípica dos diferentes genótipos de Candida parapsilosis isolados de hemocultura

Caracterização fenotípica dos diferentes genótipos de Candida parapsilosis isolados de hemocultura

Título alternativo Phenotypic characterization of different genotypes of Candida parapsilosis isolated strains from hemocultura
Autor Goncalves, Sarah Santos Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Colombo, Arnaldo Lopes Autor UNIFESP Google Scholar
Instituição Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Pós-graduação Infectologia - São Paulo
Resumo Introdução: Isolados de C. parapsilosis sao fisiologicamente indistinguiveis, mas geneticamente heterogeneos. Em estudo recente, baseado em variacoes da sequencia de ONA observada entre os grupos, Tavanti et al. (2005) propuseram que cada um desses grupos fossem considerados especies distintas, C. parapsilosis, C. orthopsilosis e C. metapsilosis, respectivamente. Objetivos: 1) Avaliar, atraves da tecnica de RAPO, a prevalencia dessas especies em isolados de ICS de varias regioes do Brasil; 2) Verificar o comportamento fenotipico dessas especies, a fim de averiguar possiveis diferencas em relacao ao perfil metabolico, sensibilidade a antifungico e producao de biofilme. Material e Metodos: 141 cepas, identificadas previamente atraves de testes fenotipicos como C. parapsilosis, foram analisadas utilizando a tecnica de RAPO para identificacao de C. parapsilosis, C. orthopsilosis e C. metapsilosis utilizando o iniciador 1281. As cepas identificadas como C. orthopsilosis e C. metapsilosis tiveram a regiao ITS do rDNA sequenciada para confirmacao da identidade. Posteriormente, as amostras encontradas como C. orthopsilosis, C. metapsilosis e 24 cepas de C. parapsilosis foram avaliadas em relacao aos seguintes testes fenotipicos: i) micromorfologia, ii) crescimento em caldo hipertonico, iii) tolerancia a temperatura de 42° C, iv) perfil bioquimico utilizando o sistema 1032 C, v) teste de susceptibilidade a antifungicos (TSA) pelo metodo de microdiluicao em caldo, utilizando anfotericina B, fluconazol, itraconazol, voriconazol, 5-fluorocitosina e caspofungina, vi) producao e quantificacao de biofilme pelo metodo de coloracao com cristal violeta. Resultados: 124 (87,9 por cento) isolados foram identificados como C. parapsilosis, 13 (9,2 por cento) isolados como C. orthopsilosis e 4 (2,9 por cento) como C. metapsilosis. Nao foi possivel a identificacao de apenas 3 isolados pela tecnica de RAPO, porem sua identificacao foi confirmada como C. orthopsilosis atraves de sequenciamento da regiao ITS do rDNA. O comportamento dos isolados das 3 especies foi semelhante em relacao ao crescimento em alta temperatura e alta concentracao salina. Nao houve diferencas micromorfologicas relevantes entre as especies. Atraves do sistema de 1032 C, foi possivel observar que somente 3 isolados de C. metapsilosis (60 por cento), foram tolerantes a actidiona e 1 (20 por cento) assimilou o acucar ribose. Quanto ao TSA, a ocorrencia de resistencia entre os isolados foi vista somente para 2 cepas frente a 5-fluorocitosina. Em relacao ao biofilme, 60 por cento (15) das cepas de C. parapsilosis foram fortes produtoras de biofilme seguidas de 14,3 por cento (2) das cepas de C. orthopsilosis. Todos os isolados de C. metapsilosis deste estudo revelaram ser fracos produtores de biofilme. Conclusao: A tecnica de RAPO, empregando o iniciador 1281, apresentou-se como um metodo pratico, rapido e eficaz na diferenciacao das especies do complexo C. parapsilosis, identificando 97,9 por cento das cepas estudadas. C. parapsilosis foi a especie mais prevalente como patogeno de infeccao sistemica que as especies do complexo C. parapsilosis. Quanto as provas fenotipicas, podemos concluir que nao sao eficientes na identificacao de especies deste complexo, sendo necessario o uso de ferramentas moleculares para correta identificacao das mesmas. Tendo em vista poucas alteracoes em relacao a susceptibilidade a drogas entre as especies do complexo, o interesse maior na identificacao esta relacionado a estudos epidemiologicos

Introduction: Candida parapsilosis strains are physiologically similar but genetically different. Some studies based on molecular methods clearly divided C. parapsilosis into three different groups (I, II and III). Recently, Tavanti et al. (2005) detected coding genes polymorphisms and suggested the replacement of the old nomenclature of C. parapsilosis groups I, II and III into 3 new species: Candida parapsilosis, Candida orthopsilosis and Candida metapsilosis, respectively. Objectives: 1) To evaluate the prevalence of these species within blood stream isolates from different Brazilian geographic areas using RAPD (Randomly Amplified Polymorphic DNA); 2) To study phenotypic characteristic of these 3 species to evaluate possible differences on biochemical profile, susceptibility to antifungal drugs and biofilms production. Material and Methods: Species identification by RAPD using the primer 1281 was carried out for isolates previously identified as C. parapsilosis. RAPD identification confirmation of C. orthopsilosis e C. metapsilosis was done by sequencing the ITS region. Four C. metapsilosis, 13 C. orthopsilosis and 24 C. parapsilosis strains were subjected to the following phenotypic tests: i) micromorphology, ii) hypertonic broth growing, iii) tolerance to 42o C, iv) biochemical profiling using ID32 C system, v) microdilution broth susceptibility testing to amphotericin B, itraconazole, voriconazole, 5- fluorocitosine and caspofungin, vi) Production and quantification of biofilm formation by crystal violet method. Results: 124 (87.9%) isolates were identified as C. parapsilosis, 13 (9.2%) as C. orthopsilosis and 4 (2.9%) as C. metapsilosis. The RAPD technique was not able to identify three isolates as C. orthopsilosis, but this was possible by sequencing the ITS region. No differences were detected among the strains under the high temperature and saline concentration growing conditions. We did not verify major micromorphological differences among the species. Three (60%) C. metapsilosis isolates were tolerant to actidione and one (20%) of them assimilated ribose on ID32C system. Two strains were resistant to 5-fluorocitosine. Fifteen (60%) C. parapsilosis and 2 (14%) C. orthopsilosis strains were high biofilms producers. Conclusion: For strains belonging to the C. parapsilosis complex RAPD method using primer 1281 is a useful tool for species identification. C. parapsilosis had the highest prevalence among all the blood stream samples studied, followed by C. orthopsilosis and C. metapsilosis. Since phenotypic methods are not effective for these species identification, molecular methods should be used. Among the strains belonging to C. parapsilosis complex, minor differences or drug susceptibility were detected, therefore species identification is indicated for epidemiology studies only.
Palavra-chave Candida
Técnica de amplificação ao acaso de DNA polimórfico
Genótipo
Fenótipo
Biofilmes
Idioma Português
Financiador Coordenação e Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Data de publicação 2007
Publicado em GONCALVES, Sarah Santos. Caracterização fenotípica dos diferentes genótipos de Candida parapsilosis isolados de hemocultura. 2007. 143 f.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 143 f.
Direito de acesso Acesso aberto Open Access
Tipo Dissertação de mestrado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/23403

Exibir registro completo




Arquivo

Nome: Publico-23403.pdf
Tamanho: 3.230MB
Formato: PDF
Descrição:
Abrir arquivo

Este item está nas seguintes coleções

Buscar


Navegar

Minha conta