Caracterização molecular da família de proteínas SAP (Serine-, Alanine-, and Proline-rich protein) de Trypanosoma cruzi e seu papel na invasão de células de mamífero.

Abstract

Para invadir celulas-alvo, as formas metaciclicas de Trypanosoma cruzi utilizam uma variedade de moleculas presentes em sua superficie e moleculas secretadas no meio extracelular que interagem com componentes do hospedeiro. As proteinas SAP compreendem uma familia multigenica cujos membros sao ricos em residuos de serina (S), alanina (A) e prolina (P). Todas as proteinas SAP contem um dominio central (SAP-CD) responsavel pela interacao e invasao de celulas de mamifero pelas formas metaciclicas de T. cruzi. Utilizando a sequencia de 513 pb do dominio central SAP-CD em analises utilizando o algoritmo blastn, nos identificamos 39 genes SAP completos no genoma de T. cruzi. A maioria destes genes foi mapeado no cromossomo in silico TcChr41; entretanto, genes SAP foram mapeados distribuidos em diversas regioes do genoma. O nivel de transcritos SAP em tripomastigotas metaciclicos foi cerca de duas vezes superior quando comparado a epimastigotas. Um anticorpo monoclonal (MAb-SAP) e um soro policlonal (anti-SAP) produzidos contra a proteina recombinante SAP-CD foram utilizados para investigar a expressao e localizacao das proteinas SAP. MAb-SAP reagiu com proteinas SAP de 55 kDa secretadas no meio extracelular por epimastigotas e tripomastigotas metaciclicos e com diferentes repertorios de variantes SAP expressos em amastigotas e tripomastigotas de cultura de tecido (TCTs). O soro policlonal anti-SAP reagiu com componentes presentes na regiao da bolsa flagelar em epimastigotas e tripomastigotas metaciclicos e com componentes da superficie celular de amastigotas extracelulares e TCTs, sugerindo que as proteinas SAP sao direcionadas para diferentes compartimentos celulares. Dez peptideos SAP foram identificados por espectrometria de massa em fracoes enriquecidas em proteinas soluveis e vesiculas secretadas por epimastigotas e tripomastigotas metaciclicos. Utilizando fragmentos derivados do dominio SAP-CD, nos identificamos uma regiao de 54 aa (SAP-CE) capaz de induzir a exocitose de lisossomos em celulas-alvo e inibir em 52 % a internalizacao das formas metaciclicas