Clonagem, expressao e caracterizacao de um inibidor de calicreina tecidual do tipo Kunitz presente em intestino de carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus

Clonagem, expressao e caracterizacao de um inibidor de calicreina tecidual do tipo Kunitz presente em intestino de carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus

Author Abreu, Patricia de Andrade Autor UNIFESP Google Scholar
Abstract O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus e um ectoparasito exclusivo de bovinos. No Brasil, e o vetor de agentes causadores da Babesiose, Anaplasmose e Riquetsiose, o que resulta em enormes prejuizos a pecuaria. O controle de R. microplus e feito principalmente pelo uso de acaricidas, no entanto a aquisicao de resistencia assim como a contaminacao dos produtos derivados de bovinos, faz com que a busca por metodos alternativos de controle sejam desenvolvidos. Um grupo de moleculas importantes na fisiologia desse carrapato sao os inibidores de proteases, ja tendo sido descrito inumeros inibidores de proteases da familia tipo Kunitz-BPTI envolvidos em processos como: controle da coagulacao, agregacao plaquetaria do hospedeiro vertebrado, mas tambem na resposta imune do proprio ectoparasito. Neste trabalho clonamos, expressamos e caracterizamos o inibidor de calicreina tecidual do tipo Kunitz, denominado de BmKK91. Esse inibidor apresenta dois dominios Kunitz-BPTI, massa molecular teorica de aproximadamente 16 kDa. O BmKK91 recombinante foi expresso em levedura P. pastoris, apresentando alto nivel de expressao. O inibidor foi purificado com uma unica etapa, em cromatografia de troca ionica. O inibidor purificado inibiu as serinoproteases tripsina, calicreina pancreatica porcina (PPK) e calicreina plasmatica humana (HuPK) (Ki = 0,2 nM, 300 nM e 847 nM, respectivamente). O BmKK91 purificado apresentou massa molecular de 13 kDa por SDS-PAGE, no entanto a massa molecular obtida por espectrometria de massa MALDI TOF esta de acordo com a massa molecular teorica esperada de 16,3 kDa. As perspectivas deste trabalho serao a caracterizacao de BmKK91 sobre calicreinas teciduais humanas que sao enzimas importantes em processos fisiopatologicos como: tumores e sua progressao e avaliacao do potencial vacinal de BmKK91 em bovinos.
Keywords Rhipicephalus
Carrapatos
Ixodidae
Calicreínas
Inibidores de Serino Proteinase
INTESTINO
Aprotinina
Language Portuguese
Date 2013
Published in São Paulo: [s.n.], 2013. 72 p.
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 72 p.
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22938

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