Estudo da atividade proteolitica e inibicao de peptidases do Plasmodium falciparum e Plasmodium chabaudi

Abstract

A malaria e uma doenca parasitaria que afeta milhoes de pessoas todos os anos, segundo a Organizacao Mundial de Saúde. Alem de ser uma doenca responsavel por altos indices de morbidade e mortalidade, e tambem um problema socioeconomico mundial, sendo que 50% da populacao mundial esta sobre risco de contrair a infeccao. O parasita em seu complexo ciclo de vida passa por um hospedeiro invertebrado e um hospedeiro vertebrado. Neste ultimo, o seu ciclo intra-eritrocitico leva ao desequilibrio do seu hospedeiro, alterando a hemodinamica, a coagulacao e o sistema inflamatorio. A analise do genoma de Plasmodium falciparum permitiu a identificacao de 90 diferentes proteases que estao envolvidas em inumeros processos como degradacao da hemoglobina, invasao e egresso dos eritrocitos. Apesar de se conhecer bem o envolvimento destas enzimas neste processo de degradacao o papel dessas proteases na degradacao de outras proteinas do hospedeiro e pouco explorado. Uma possivel funcao destas enzimas e atuar com o hospedeiro na tentativa de minimizar o desequilibrio gerado pela infeccao e aumentar a sobrevivencia do parasita. Dentre as proteinas plasmaticas, o plasminogenio participa nos processos de coagulacao, angiogenese e inflamacao, a partir da geracao de plasmina e angiostatina resultantes da hidrolise por diversas proteases ou ativadores do plasminogenio. Este novo aspecto sobre a interacao parasita-hospedeiro e um dos objetos de estudo da presente tese. Usando diferentes metodos bioquimicos observamos que o plasminogenio e hidrolisado por P.falciparum, P. chabaudi e falcipainas recombinantes (cisteino - proteases do P. falciparum). O processamento de plasminogenio pelos parasitas gerou peptideos angiostaticos que inibiram a angiogenese e foram capazes de aumentar a concentracao de calcio citoplasmatico em celulas endoteliais umbilicais humanas (HUVEC), funcoes previamente descritas para a angiostatina. Ainda na presente tese estudamos a acao inibitoria das cistatinas recombinantes de cana-de-acucar (canacitatinas CaneCPI-1, CaneCPI-2, CaneCPI-3, CaneCPI-4 e CaneCPI-4 TAT) sobre as cisteino-proteases do Plasmodium. Estas cistatinas foram testadas como possiveis candidatas a novas drogas, com a capacidade de inibir as cisteino-proteases do parasita