Investigacao de cininogenases endogenas em modelos celulares: caracterizacao parcial e interacao com cininogenio humano de alta massa molecular

Investigacao de cininogenases endogenas em modelos celulares: caracterizacao parcial e interacao com cininogenio humano de alta massa molecular

Título alternativo Investigation of endogenous kininogenases in cell models: partial characterization and interaction with human high molecular weight kininogen
Autor Damasceno, Igor Zumba Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo A ligacao dos cininogenios as celulas e importante no acumulo de precursores das cininas na superficie das celulas alvo. A interacao entre o cininogenio de alta massa molecular (HK) e a superficie celular resulta na sua hidrolise e captura mediada por proteoglicanos (PGs). Nessas condicoes o peptideo vasoativo bradicinina (BK) e liberado por enzimas da classe serino ou cisteino proteases. O presente trabalho tem como objetivo purificar, identificar e caracterizar enzima (s), envolvidas no processamento celular do HK em linhagens celulares CHO-K1 selvagem e CHO-745 mutante deficiente na producao de PGs. As fracoes de membrana e lisados celulares foram preparados por sonicacao e centrifugacao, e a atividade cininogenasica foi ensaiada em tampao pH 5,5 ou pH 7,4 a 37ºC por 4 h. O HK intacto ou seus fragmentos foram analisados por imunodeteccao usando anticorpos policlonal anti-HK, e monoclonais anti-BK e anti-HKL1 (HKD6). As proteinas presentes nos lisados de ambas as linhagens celulares foram separadas por cromatografia de afinidade em resina antipaina-Sepharose. A fracao de lisado de CHO-K1 apresentou melhor especificidade sobre o HK integro em pH 5,5 e aquela preparada a partir de CHO-745 hidrolisou o HK integro em ambos pH 5,5 e 7,4; ambas as fracoes de membrana apresentaram atividades cininogenasicas nos valores de pH 5,5 e 7,4. Em zimogramas as fracoes de CHO-K1 nao retida e retida em resina antipaina-Sepharose apresentaram atividades proteoliticas sobre caseina ou gelatina apenas em pH 7,4 e as proteinas da fracoes de CHO-745 nao retida e retida apresentaram atividades proteoliticas apenas sobre caseina em pH 7,4. As fracoes de CHO-745 hidrolisaram totalmente o HK integro, em cadeias pesada e leve, esta contendo o dominio D6 (T503-S626), com liberacao de BK e independente do pH do meio. As fracoes obtidas de CHO-K1 hidrolisaram o HK integro em cadeias pesada e leve, independente do pH, com menor especificidade comparada as fracoes de CHO-745 e apenas a fracao nao retida nao liberou BK. A analise do sequenciamento de proteina presente nas fracoes nao retidas de CHO-K1 e CHO-745 identificou a proteina isolada como pertencente a familia das novas proteinas nucleares ricas em residuos cisteina/serina (CSRNP). A atividade cininogenasica de CHO-K1, sem liberacao de BK, pode ser atribuida a uma metaloprotease. Os resultados obtidos com as linhagens celulares, que diferem quanto a producao de PGs, permitem concluir que os GAGs exercem acao nao somente nos mecanismos de interacao mas tambem de processamento celular do HK
Assunto Peptídeo Hidrolases
Cininogênios
Proteoglicanas
Células Tecais
Cricetulus
Idioma Português
Data 2012
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2012. 126 p.
Editor Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 126 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22680

Mostrar registro completo




Arquivos deste item

Arquivos Tamanho Formato Visualização

Não existem arquivos associados a este item.

Este item aparece na(s) seguinte(s) coleção(s)