Analise fenotipica e molecular da formacao de biofilmes por amostras de Escherichia coli enteropatogenica (EPEC)

Analise fenotipica e molecular da formacao de biofilmes por amostras de Escherichia coli enteropatogenica (EPEC)

Título alternativo Phenotypic and molecular analysis of biofilm formation by enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) strains
Autor Nascimento, Heloisa Helena do Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo Neste estudo analisamos fenotipicamente e genotipicamente 223 amostras de Escherichia coli enteropatogenica (EPEC), sendo 70 tipicas (tEPEC) e 153 atipicas (aEPEC) isoladas de criancas com e sem diarreia quanto a capacidade de formacao de biofilme em superficie de poliestireno. A formacao de biofilme a 37ºC foi observada em 10 (14.3%) amostras de tEPEC, sendo a maioria pertencentes aos sorotipos O119:H6 (4 amostras) e O111:NM (2 amostras). Todas as 10 amostras de tEPEC formadoras de biofilme desenvolveram a 37oC uma colonia com morfotipo RDAR e 6 formaram uma pelicula densa e elastica na interface liquido-ar. A maioria (80%) das amostras formadoras de biofilme foi resistente a tres ou mais drogas. Os resultados de PCR mostraram que 4 e amostras,espectivamente, foram positivas para os genes csgA e crl, relacionados a subunidade estrutural e regulador da expressao de curli, respectivamente. Os genes fimH e fimA relacionados a fimbria do tipo I foram encontrados em 8 e 4 amostras, respectivamente. Em nenhuma das amostras foi encontrado o gene fliC. Em relacao a pesquisa de genes para as proteinas autotransportadoras, os genes ehaAa, ehaAb, ehaBa, ehaBb e flu foram encontrados em 1, 4, 4, 8 e 3 amostras, respectivamente. Os genes cah e sab nao ocorreram em nenhuma das amostras Um total de 37 (24.2%) amostras de aEPEC foram capazes de formar biofilme nas temperaturas estudadas (26ºC e 37oC), sendo que a temperatura de 26ºC proporcionou um melhor desenvolvimento do biofilme. Entre essas 37 amostras, 13 pertenciam aos sorogrupos classicos de EPEC, sendo O119 o mais frequente. Um total de 18 amostras apresentou o morfotipo RDAR em agar vermelho Congo e 19 formaram pelicula na interface liquido-ar. Apenas 7 amostras foram resistentes a uma ou mais drogas. Todas as amostras, exceto uma, apresentaram o gene fimH e dessas 28 foram positivas para fimA. Os genes csgA e crl (curli) foram encontrados em 18 e 24 amostras, respectivamente. Nove amostras forma positivas para o gene fliC. Os genes flu, ehaAa, ehaAb, ehaBa, ehaBb e cah foram encontrados em 8, 8, 5, 17, 23 e 7 amostras, respectivamente. Nenhuma amostra apresentou o gene sab. Com o objetivo de identificar genes envolvidos na formacao de biofilme, foi selecionada a amostra de aEPEC A111 (O119:HNT) que nao apresentava a sequencia genetica csgA. Foi construido uma mini-Tn5 biblioteca dessa amostra e P a g i n a | 9 identificado 8 mutantes, que haviam perdido a capacidade de formar biofilme, desenvolver o morfotipo RDAR e pelicula na interface liquido-ar. A analise da sequencia do DNA flanqueado pela insercao do mini-Tn5 revelou a identificacao dos genes fimC, fimD e fimH, relacionados a formacao da fimbria tipo I, bem como sequencias das proteinas diguanilato ciclase e ATP sintase. Concluindo, algumas amostras de EPEC tipica e atipica pertencentes principalmente ao sorogrupo O119, apresentaram a capacidade de formar biofilmes. A maioria dessas amostras apresentou um comportamento multicelular e pelo menos uma sequencia genetica relacionada a formacao de biofilme. A caracterizacao preliminar dos genes envolvidos na formacao de biofilme da amostra A111 identificou mutantes nao formadores de biofilme apresentando insercao do mini-Tn5 em genes da fimbria tipo I
Palavra-chave Biofilmes
Microbiologia
Escherichia coli Enteropatogênica/patogenicidade
Idioma Português
Data de publicação 2012
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2012. 80 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 80 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22455

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