Síntese e estudos enzimáticos e conformacionais de análogos da angiotensina I e da bradicinina contendo marcador de Spin Toc

Síntese e estudos enzimáticos e conformacionais de análogos da angiotensina I e da bradicinina contendo marcador de Spin Toc

Título alternativo Synthesis and enzyme studies and conformaciais analogues of angiotensin I and bradykinin-containing marker Knock Spin
Autor Teixeira, Luis Gustavo de Deus Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Nakaie, Clovis Ryuichi Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo O presente projeto procurou investigar os peptideos vasoativos angiotensina I (AI) e bradicinina (BK) como substratos da enzima conversora da angiotensina I (ECA), lancando-se mao da marcacao dos mesmos com um derivado de aminoacido paramagnetico e supressor de fluorescencia. O composto ciclico 2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-oxil-4-amino-4-carboxilico (TOAC) foi o escolhido e analogos da AI e BK marcados nas posicoes 0, 1, 3, 5, 8, 9 e 10 e 0, 3, 7 e 9, respectivamente foram sintetizados. Em termos farmacologicos, apenas os derivados de ambos os peptideos marcados nas extremidades aminicas ainda mantiveram parcialmente as atividades contrateis em utero de rata e ileo isolado de cobaia. Quanto as suas propriedades de substrato frente a ECA, os derivados que continham o TOAC mais afastados das ligacoes suceptiveis a hidrolise (posicoes 8-9 para a AI e 7-8 e 5-6 para a BK) foram os que mantiveram ainda propriedades de substratos para esta enzima. Com o objetivo de encontrar correlacoes entre as estruturas destes derivados peptidicos e suas atividades farmacologicas e tambem de substrato enzimatico, as espectroscopias de RPE (Ressonancia Paramagnetica Eletronica), viavel em funcao da presenca do TOAC, CD (Circular Dichroism) e fluorescencia foram aplicadas para a avaliacao conformacional dos mesmos, variando-se tanto o pH do meio quanto a porcentagem de TFE em solucao. No aspecto geral, praticamente todos os peptideos estudados apresentaram conformacoes estendidas, mas com algumas diferencas especificas entre si. A adicao dos solventes estruturantes teve efeitos diferenciados nestes analogos e de mais importante, se observou caracteristicas conformacionais similares entre alguns analogos e seus peptideos nativos (AI e BK), sendo estes, os que se mostraram mais ativos farmacologicamente e tambem em termos de propriedades de substrato frente a ECA. A parte final desta tese envolveu a tentativa de monitorar o processo da hidrolise enzimatica dos substratos, via RPE, fluorescencia e CD. Este enfoque, de carater inovador, apresentou dados cineticos, principalmente via as tres espectroscopias acima referidas, que permitiram distinguir caracteristicas de catalise especificas para alguns substratos. Esta constatacao deixa em aberto a perspectivas de que, em conjugacao com outras estrategias experimentais a serem ainda propostas, podem facilitar um melhor entendimento do complexo mecanismo de acao catalitica da ECA. Alem disso, o projeto permite tambem antever aplicacoes para outras enzimas, nao necessariamente envolvidas nos sistemas renina-angiotensina ou cinina-calicreina envolvidos no presente trabalho
Palavra-chave Peptídeos
Angiotensinas
Bradicinina
Peptidil Dipeptidase A
Marcadores de Spin
Espectroscopia de Ressonância de Spin Eletrônica
Peptides
Angiotensins
Bradykinin
Peptidyl-Dipeptidase A
Spin Labels
Electron Spin Resonance Spectroscopy
Idioma Português
Data de publicação 2011
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2011. 179 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 179 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22323

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