Estudo dos mecanismos de acao da giroxina, uma serinoprotease do veneno da cascavel Crotalus durissus terrificus

Estudo dos mecanismos de acao da giroxina, uma serinoprotease do veneno da cascavel Crotalus durissus terrificus

Título alternativo Mechanism of gyroxin action, a serine protease from Crotalus durissus terrificus venom
Autor Yonamine-Asanuma, Camila Miyagui Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo A giroxina e uma serinoprotease trombina-simile do veneno da cascavel Crotalus durissus terrificus que, quando injetada por via intravenosa ou via intraperitonial, promove o comportamento de rolamento em barril em camundongos. Apesar das semelhancas com a trombina, esta e incapaz de promover esse comportamento de giros do animal em torno do seu eixo longitudinal, descrito unicamente para a giroxina. Neste trabalho, foram realizadas as caracterizacoes enzimatica, bioquimica e biologica da giroxina. Os resultados obtidos foram: a giroxina e Nglicosilada, apresenta massa molecular de 29 kDa, e pH otimo para hidrolise do substrato ZFR-MCA de 8,4. A atividade hidrolitica da giroxina aumenta com a elevacao da temperatura (25 a 45ºC) e diminui com o aumento da concentracao de NaCl. A giroxina hidrolisa o substrato Abz-KLXSSKQ-EDDnp, com clara preferencia pelo residuo Arg na posicao P1 A caracterizacao biologica da giroxina permitiu demonstrar que a sindrome de rolamento em barril em camundongos pode ser relacionada a uma possivel acao no sistema nervoso central, e este evento convulsivo foi bloqueado pelo MK-801 (antagonista do receptor de glutamato, subtipo NMDA). Baseado nas evidencias de envolvimento do sistema glutamatergico nas crises convulsivas e a sua possivel modulacao por receptores ativados por protease (PARs), descritos como potenciais alvos para a acao biologica da giroxina, avaliamos comparativamente os efeitos da giroxina e da trombina nos PARs; inicialmente, pela caracterizacao da atividade hidrolitica sobre os peptideos que mimetizam os sitios de clivagem para ativacao dos PARs e, posteriormente, pelo estudo funcional dos efeitos da giroxina nos PARs em cultura primaria de astrocitos. Os peptideos PAR-1, -3 e -4 (ct/lg) foram hidrolisados pela giroxina apos o residuo de Arg, enquanto a trombina hidrolisou os peptideos PAR- 1 e -4 (ct/lg) apos o residuo de Arg e PAR-3 (ct/lg) apos o residuo de Lys. A giroxina hidrolisa o peptideo PAR-4 (ct/lg) apresentando valores de kcat/KM 2.150 (curto) a 400 vezes (longo) menores do que o determinado para a trombina. A ativacao de PARs em astrocitos pela giroxina nao foi observada, mas a sua capacidade de interferir com a ativacao de PAR-1 pela trombina e pelo seu agonista foi demonstrada. O peptideo PAR-2 nao foi analisado neste trabalho porque este subtipo de receptor PAR e somente ativado pela tripsina e nao pela trombina. Este trabalho permitiu confirmar que a giroxina e N-glicosilada e demonstrou pela primeira vez a sua preferencia pelo residuo de Arg na posicao P1 do substrato. Alem disto, a determinacao do pH otimo e da influencia da temperatura e sal na atividade enzimatica da giroxina sao de grande importancia para o desenho de novas estrategias experimentais que permitam desvendar o mecanismo molecular envolvido no efeito biologico da giroxina. Neste aspecto, os estudos realizados aqui permitem excluir o envolvimento dos PARs na sindrome do rolamento em barril, e indicam que a acao deve ocorrer por via no sistema nervoso central e com o envolvimento do sistema glutamatergico, uma vez que este evento convulsivo foi bloqueado pelo MK-801
Palavra-chave Peptídeo Hidrolases
Venenos de Crotalídeos
Convulsões
Receptores Ativados por Proteinase
Idioma Português
Data de publicação 2012
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2012. 86 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 86 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22197

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