Padronização e avaliação da identificação e resistência aos antimicrobianos de patógenos causadores de infecção de corrente sanguínea pela técnica da reação em cadeia da polimerase em tempo real de pacientes submetidos à transplantes de células-tronco hematopoiéticas

Padronização e avaliação da identificação e resistência aos antimicrobianos de patógenos causadores de infecção de corrente sanguínea pela técnica da reação em cadeia da polimerase em tempo real de pacientes submetidos à transplantes de células-tronco hematopoiéticas

Título alternativo Standardization and evaluation microorganisms identification and antimicrobial resistance of the pathogens causing bloodstream infections by real-time polymerase chain reaction of patients undergoing hematopoietic stem cells transplant
Autor Menezes, Liana Carballo Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Pignatari, Antonio Carlos Campos Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo A identificacao rapida de patogenos e da resistencia antimicrobiana em infeccoes da corrente sanguinea (ICS) diminui a morbidade e mortalidade, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Este estudo foi desenhado para detectar 17 patogenos e 10 genes de resistencia a antimicrobianos direto de frascos de hemocultura e sangue periferico pela reacao em cadeia da polimerase em Tempo Real. Metodos: O limite de deteccao (LoD) e limite de corte (ocutoffo) foram realizados de acordo com oClinical and Laboratory Standards Instituteo (CLSI). A sensibilidade e a especificidade clinica foram calculadas pela curva orelative operating characteristico (ROC). Um total de 160 frascos de hemocultura e 33 sangue periferico de paciente de transplante de celulas-tronco hematopoietica (TCTH) foram triadas por sondas Gram especificas por PCR em Tempo Real. Dezessete sequencias genero especifico foram avaliadas utilizando sondas TaqMan e para os genes de resistencia blaSHV, blaTEM, blaCTX, blaKPC, blaIMP, blaSPM, blaVIM, vanA, vanB e mecA foi utilizado o metodo com SYBR Green. Resultados: Os ensaios de PCR em Tempo Real foram capazes de detectar os genes alvo nas diluicoes correspondente 15 a 1,5 UFC por reacao. Os menores valores de Ct do LoD foram apresentados pelos microrganismos Staphylococcus coagulase negativo (SCoN), Stenotrophomonas maltophilia e Escherichia coli, 30,9; 31,6 e 32,6 respectivamente. A area sob a curva ROC mostrou um desempenho satisfatorio acima de 0,70 para a maioria dos genes estudados. A sensibilidade pela curva ROC foi superior a 80% para os genes blaKPC e 16S rDNA Gram positivos, e abaixo de 60% para blaSHV, blaTEM e vanB. Vinte e quatro das 33 amostras positivas foram concordantes entre hemocultura e qPCR. A identificacao de patogenos foi discordante em treze amostras. O gene mecA foi detectado em 12 dos 15 SCoN e 4 Enterococcus spp. foram positivos para o gene vanA. Foram detectados duas amostras com o gene blaCTX e tres blaSHV por PCR em Tempo Real. Os genes para metalo-β-lactamase e blaKPC e nao foram detectados. Cinco especies de fungos foram identificados apenas por PCR em Tempo Real. O tratamento empirico considerando os resultados dos testes fenotipicos apresentou antibioticoterapia previa inadequada em 66,6 % dos casos de ICS, 33,3% foram corrigidos apos o resultado da coloracao de Gram, e 6,66% mantiveram-se inadequados apos o resultado final da hemocultura com o antibiograma. Conclusao: A PCR em Tempo Real pode ser uma ferramenta complementar util na identificacao precoce de agentes patogenicos e genes de resistencia a antimicrobianos na ICS em pacientes submetidos a TCTH
Palavra-chave Humanos
Reação em cadeia da polimerase em tempo real
Resistência microbiana a medicamentos
Transplante de células-tronco hematopoéticas
Infecções bacterianas
Idioma Português
Data de publicação 2012
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2012. 240 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 240 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22129

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