Efeitos moleculares de curto prazo da varicocele experimental sobre a expressao de receptores hormonais e proteinas testiculares

Efeitos moleculares de curto prazo da varicocele experimental sobre a expressao de receptores hormonais e proteinas testiculares

Título alternativo Short-term molecular effects of experimental varicocele on the expression of hormone receptors and testis proteins
Autor Soares, Thiago da Silva Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo Varicocele causa uma dilatacao anormal do plexo pampiniforme, das veias espermaticas e colaterais que chegam a iliaca e esta associada a infertilidade masculina. O objetivo deste estudo visa avaliar os efeitos da varicocele, induzida cirurgicamente em ratos, na histologia e na morfologia dos tubulos seminiferos, nos niveis de testosterona e estradiol plasmatico e tecidual, na expressao de proteinas testiculares, incluindo mais detalhadamente a analise da expressao dos receptores de androgeno (AR) e estrogeno (ESR1, ESR2 e GPER) no testiculo. Ratos com 40-42 dias de idade foram divididos em dois grupos experimentais, animais submetidos a oclusao parcial da veia renal esquerda para a inducao da varicocele e animais falso-operados (controle). Apos 4 semanas da cirurgia, os animais foram sacrificados e o diametro da veia espermatica esquerda foi avaliado e observado um aumento de cerca 3 vezes no diametro desta veia nos animais com varicocele. O sangue foi retirado e o plasma separado, os testiculos direito e esquerdo foram retirados e dissecados. As concentracoes de testosterona plasmatica e tecidual e de estradiol plasmatico foram determinadas por radioimunoensaio. A varicocele nao alterou a concentracao plasmatica de estradiol e testosterona nem a concentracao de testosterona no testiculo direito e esquerdo. Cortes histologicos dos testiculos foram obtidos e corados com hematoxilina e eosina e analisados com o auxilio de um microscopio de luz. Nao foram observadas alteracoes histologicas nos testiculos de ratos submetidos a varicocele quando comparadas com os testiculos obtidos do animal controle. Foi observada somente uma diminuicao (3,8%) no diametro dos tubulos seminiferos de ratos com varicocele. O RNA total foi extraido dos testiculos direito e esquerdo de ratos controle e com varicocele. Os transcritos para AR, ERS1, ERS2, GPER e β-actina (controle endogeno) foram avaliados por PCR em tempo real. Foram tambem realizados ensaios de Western blot com o extrato total de testiculos e anticorpos especificos contra AR, ESR1, ESR2 e GAPDH (controle endogeno). Os controles negativos dos ensaios de Western Blot foram realizados pela incubacao da membrana na presenca do anticorpo primario previamente incubado com o respectivo peptideo bloqueador. A varicocele nao alterou os niveis dos transcritos para AR, ERS1, ERS2, mas diminuiu a expressao do transcrito para o GPER no testiculo esquerdo. Com relacao a proteina, a varicocele diminuiu significativamente a expressao do AR, 53% e 46% respectivamente, no testiculo esquerdo e direito. A varicocele nao alterou a expressao do ERS1 e ERS2. A expressao do GPER ainda nao foi determinada. Proteinas solubilizadas do extrato testicular obtidas do testiculo esquerdo de ratos controle e com varicocele foram submetidas a eletroforese bidimensional. Foram identificados 617 spots proteicos no testiculo de rato controle e com varicocele. 29 spots proteicos foram diferencialmente regulados pela varicocele. A varicocele induziu um aumento na expressao de 6 spots proteicos e uma diminuicao na expressao de 23 spots proteicos presentes no testiculo. Estas proteinas foram identificadas por espectrometria de massa. A varicocele levou ao aumento da expressao da proteina RACK1 (receptor for activated C kinase), que esta envolvida com a regulacao do AR. A varicocele tambem diminuiu a expressao de diferentes proteinas, como por exemplo, diidrolipoamida desidrogenase, alfa-enolase, transtiretina e pirofosfatase 1, que estao envolvidas com a maturacao e reacao acrossomica do espermatozoide. Em conclusao, o presente estudo mostra que a varicocele diminui a expressao do AR, mecanismos pos-transcricionais provavelmente estao envolvidos. Esta regulacao do AR pode ter um importante papel na disfuncao testicular. Alem disso, a varicocele diminui a expressao de varias proteinas testiculares, as quais podem ser potenciais alvos para avaliar a funcao do espermatozoide e possivelmente a infertilidade
Palavra-chave Animais
Varicocele
Proteínas
Infertilidade Masculina
Receptores Androgênicos
Receptores Estrogênicos
Ratos
Animais
Idioma Português
Data de publicação 2011
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2011. 137 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 137 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22124

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