Analise do repertorio de transcritos do intestino do inseto Triatoma infestans em resposta a infeccao pelo protozoario Trypanosoma cruzi e caracterizacao de uma cistatina do intestino do inseto

Analise do repertorio de transcritos do intestino do inseto Triatoma infestans em resposta a infeccao pelo protozoario Trypanosoma cruzi e caracterizacao de uma cistatina do intestino do inseto

Título alternativo Analysis of a repertoire of transcripts from midgut of the insect Triatoma infestans in response to Trypanosoma cruzi infection and characterization of a cystatin from the midgut of insect
Autor Buarque, Diego de Souza Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo A doenca de Chagas e uma doenca causada pelo protozoario Trypanosoma cruzi e transmitida por insetos da subfamilia Triatominae. Para identificar componentes envolvidos na relacao vetor - protozoario, bibliotecas de cDNA foram construidas a partir de RNA isolado do intestino medio de Triatoma infestans nao infectados e infectados com T. cruzi. Cerca de 440 Expressed Sequence Tags (ESTs) de alta qualidade foram geradas a partir de cada biblioteca de cDNA de T. infestans. As sequencias foram agrupadas em 380 contigs apresentando 664.78 pares de bases (pb) de comprimento medio. A analise das ESTs foi complementada por experimentos utilizando PCR tempo real para transcritos diferencialmente expressos em intestino medio de T. infestans. Proteina do tipo Nitroforina, lisozima, catepsina D e uma proteina putativa de 15 kDa tiveram sua expressao significativamente aumentada apos infeccao, enquanto que tioredoxina redutase teve sua expressao significativamente diminuida. Entre as sequencias obtidas, uma ORF similar a uma cistatina do tipo 2 foi identificada. Em seguida, o fragmento que codifica a cistatina madura (Tigutcystatin) foi clonado em vetor pET-14b e a proteina foi expressa em E. coli cepa Rosetta gami. Tigutcystatin inibiu eficientemente cruzaina, uma enzima do tipo catepsina L de T. cruzi (Ki = 3,29 nM). Tigutcystatin foi principalmente expresso em intestino medio anterior e teve sua expressao significativamente aumentada em T. infestans infectado com T. cruzi. Este trabalho apresenta, pela primeira vez, uma analise global da resposta gerada no intestino de T. infestans mediante infeccao com o T. cruzi, bem como a caracterizacao de uma cistatina do inseto. Uma vez que o protozoario nao e patogenico para o inseto, possivelmente as moleculas descritas atuam de forma eficiente para o controle do T. cruzi dentro do intestino do inseto. Estes dados podem contribuir no conhecimento atual a respeito das interacoes vetor-parasita
Palavra-chave Cistatinas
Triatoma
Trypanosoma cruzi
Infecção
Idioma Português
Data de publicação 2012
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2012. 178 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 178 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22012

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