Efeito da proteina anti-inflamatoria anexina A1 nas celulas epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19) apos ativacao pelo inflamogeno lipopolissaca

Efeito da proteina anti-inflamatoria anexina A1 nas celulas epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19) apos ativacao pelo inflamogeno lipopolissaca

Título alternativo Anti-inflammatory effect of annexin A1 protein in human retinal pigment epithelium (ARPE-19) after activation by inflammogen lipopolysaccharide
Autor Mimura, Kallyne Kioko Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo Introdução: A inflamacao ocular e geralmente tratada com glicocorticoides, cujos efeitos colaterais estimulam novas estrategias terapeuticas. Nesse aspecto, destacamos a anexina A1 (ANXA1), proteina com potencial anti-inflamatorio, cuja acao em tecidos oculares foi pouco investigada. Objetivo: No presente estudo avaliamos a expressao e o mecanismo de acao da ANXA1 nas celulas epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19) apos ativacao pelo inflamogeno lipopolissacarideo (LPS) e tratamento com ANXA12-26 (peptideo Ac2-26 da regiao N-terminal da ANXA1). Metodos: As celulas ARPE-19 foram cultivadas em meio DMEM:F-12 completo (controle) e ativadas por LPS em 1, 2, 4, 24 e 48 horas para avaliar o melhor tempo experimental. Nessas celulas, analisamos a expressao e localizacao da ANXA1 endogena por Western blotting (WB) e imunocitoquimica ultraestrutural e, nos sobrenadantes, os niveis dos mediadores inflamatorios pelo metodo de ELISA. Para avaliar o efeito anti-inflamatorio da ANXA1, as celulas foram submetidas as seguintes condicoes experimentais: controle, ativadas pelo LPS, tratadas com LPS + ANXA12-26 e, somente com ANXA12-26, por 24 horas. Nessas condicoes analisamos, nos sobrenadantes, as citocinas pro-inflamatorias pelo metodo de ELISA. Nas celulas, a citotoxidade dos tratamentos foi investigada por ensaios de viabilidade e proliferacao celular e, a expressao da ANXA1 endogena e do receptor FPR2 pelo metodo de WB. Ainda, analisamos a expressao da enzima ciclo-oxigenase 2 (COX-2) por imunofluorescencia, o fator de transcricao nuclear kappa beta (NF-κβ) pelo ensaio de ELISA e, a expressao genica de mediadores pro-inflamatorios pela tecnica de PCR. Resultados: A ativacao das celulas ARPE-19 pelo LPS diminui os niveis intracelulares de ANXA1 nos tempos de 2 e 24 horas, indicando o envolvimento dessa proteina na fisiologia das celulas ARPE-19 controles e ativadas por endotoxina. Apos 24 horas do estimulo inflamatorio, ocorre aumento da liberacao das citocinas TNF-α, IL-6 e IL-8 no sobrenadante das celulas ARPE-19. O tratamento farmacologico das celulas ativadas pelo LPS na dosagem de 0,1 mg/mL de ANXA12-26, reduz a liberacao das citocinas IL-6 e IL-8 em relacao ao controle, e nao apresenta citotoxidade celular. As celulas ARPE-19, tratadas com LPS, LPS/ANXA12-26 e ANXA12-26, aumentam a do receptor FPR2, enquanto o tratamento LPS/ANXA12-26 reduz a expressao da COX-2. Alem disso, LPS/ANXA12-26 nao diminui a translocacao do NF- κβ e a expressao genica dos mediadores inflamatorios IL-6, IL-8 e COX-2 em relacao as celulas somente tratadas com LPS. Conclusao: A reducao da expressao proteica dos mediadores inflamatorios, pelo tratamento LPS/ANXA12-26, parece nao ser dependente de acao da ANXA1 na expressao genica, ja que os niveis de RNAm desses mediadores nao foram afetados, indicando sua acao pos-transcricional. Em conjunto, os dados obtidos nesse trabalho mostram a efetiva acao anti-inflamatoria da ANXA1 sobre as celulas ARPE-19 quando submetidas a endotoxemia, e o seu potencial uso como uma alternativa terapeutica nas doencas inflamatorias oculares
Palavra-chave Humanos
Anexina A1
Epitélio Pigmentado da Retina
Lipopolissacarídeos
Inflamação
Mediadores da Inflamação
Humanos
Idioma Português
Data de publicação 2012
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2012. 175 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 175 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/21981

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