Efeito da proteina anti-inflamatoria anexina A1 nas celulas epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19) apos ativacao pelo inflamogeno lipopolissaca

Efeito da proteina anti-inflamatoria anexina A1 nas celulas epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19) apos ativacao pelo inflamogeno lipopolissaca

Título alternativo Anti-inflammatory effect of annexin A1 protein in human retinal pigment epithelium (ARPE-19) after activation by inflammogen lipopolysaccharide
Autor Mimura, Kallyne Kioko Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo Introdução: A inflamacao ocular e geralmente tratada com glicocorticoides, cujos efeitos colaterais estimulam novas estrategias terapeuticas. Nesse aspecto, destacamos a anexina A1 (ANXA1), proteina com potencial anti-inflamatorio, cuja acao em tecidos oculares foi pouco investigada. Objetivo: No presente estudo avaliamos a expressao e o mecanismo de acao da ANXA1 nas celulas epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19) apos ativacao pelo inflamogeno lipopolissacarideo (LPS) e tratamento com ANXA12-26 (peptideo Ac2-26 da regiao N-terminal da ANXA1). Metodos: As celulas ARPE-19 foram cultivadas em meio DMEM:F-12 completo (controle) e ativadas por LPS em 1, 2, 4, 24 e 48 horas para avaliar o melhor tempo experimental. Nessas celulas, analisamos a expressao e localizacao da ANXA1 endogena por Western blotting (WB) e imunocitoquimica ultraestrutural e, nos sobrenadantes, os niveis dos mediadores inflamatorios pelo metodo de ELISA. Para avaliar o efeito anti-inflamatorio da ANXA1, as celulas foram submetidas as seguintes condicoes experimentais: controle, ativadas pelo LPS, tratadas com LPS + ANXA12-26 e, somente com ANXA12-26, por 24 horas. Nessas condicoes analisamos, nos sobrenadantes, as citocinas pro-inflamatorias pelo metodo de ELISA. Nas celulas, a citotoxidade dos tratamentos foi investigada por ensaios de viabilidade e proliferacao celular e, a expressao da ANXA1 endogena e do receptor FPR2 pelo metodo de WB. Ainda, analisamos a expressao da enzima ciclo-oxigenase 2 (COX-2) por imunofluorescencia, o fator de transcricao nuclear kappa beta (NF-κβ) pelo ensaio de ELISA e, a expressao genica de mediadores pro-inflamatorios pela tecnica de PCR. Resultados: A ativacao das celulas ARPE-19 pelo LPS diminui os niveis intracelulares de ANXA1 nos tempos de 2 e 24 horas, indicando o envolvimento dessa proteina na fisiologia das celulas ARPE-19 controles e ativadas por endotoxina. Apos 24 horas do estimulo inflamatorio, ocorre aumento da liberacao das citocinas TNF-α, IL-6 e IL-8 no sobrenadante das celulas ARPE-19. O tratamento farmacologico das celulas ativadas pelo LPS na dosagem de 0,1 mg/mL de ANXA12-26, reduz a liberacao das citocinas IL-6 e IL-8 em relacao ao controle, e nao apresenta citotoxidade celular. As celulas ARPE-19, tratadas com LPS, LPS/ANXA12-26 e ANXA12-26, aumentam a do receptor FPR2, enquanto o tratamento LPS/ANXA12-26 reduz a expressao da COX-2. Alem disso, LPS/ANXA12-26 nao diminui a translocacao do NF- κβ e a expressao genica dos mediadores inflamatorios IL-6, IL-8 e COX-2 em relacao as celulas somente tratadas com LPS. Conclusao: A reducao da expressao proteica dos mediadores inflamatorios, pelo tratamento LPS/ANXA12-26, parece nao ser dependente de acao da ANXA1 na expressao genica, ja que os niveis de RNAm desses mediadores nao foram afetados, indicando sua acao pos-transcricional. Em conjunto, os dados obtidos nesse trabalho mostram a efetiva acao anti-inflamatoria da ANXA1 sobre as celulas ARPE-19 quando submetidas a endotoxemia, e o seu potencial uso como uma alternativa terapeutica nas doencas inflamatorias oculares
Assunto Humanos
Anexina A1
Epitélio Pigmentado da Retina
Lipopolissacarídeos
Inflamação
Mediadores da Inflamação
Humanos
Idioma Português
Data 2012
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2012. 175 p.
Editor Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 175 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/21981

Mostrar registro completo




Arquivos deste item

Arquivos Tamanho Formato Visualização

Não existem arquivos associados a este item.

Este item aparece na(s) seguinte(s) coleção(s)