Clonagem, obtencao e caracterizacao de heparinase recombinante

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dc.contributor.author Rotger, Tabata Smaniotto Roschel [UNIFESP]
dc.date.accessioned 2015-12-06T23:04:27Z
dc.date.available 2015-12-06T23:04:27Z
dc.date.issued 2003
dc.identifier.citation São Paulo: [s.n.], 2003. 88 p.
dc.identifier.uri http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/19832
dc.description.abstract A producao de enzimas purificadas que degradam glicosaminoglicanos com alta especificidade e realmente importante na determinacao da estrutura desses compostos. A heparinase e uma liase produzida por Flavobacterium heparinum. Em nosso estudo, o segmento inteiro do DNA da heparinase foi obtido a partir da Flavobacterium heparinum i atraves, de reacao del PCR usando' 'primersj especificos baseados na heparinase clonadal Os produtos de PCR foram ligados no vetor pGEM-T e submetidos a analises que demonstraram alto grau de homologia com a heparinase clonada Foi inserido o DNA da heparinase no plasmideo de expressao pGEX-2TK, usando os sitios de restricao Bam HI e Eco RI. A heparinase foi, entao, clonada in frameo com a glutationa sulfotransferase utilizando-se o sistema de expressao GST. O plasmideo recombinante foi usado para transformar a bacteria BL21 Apos a inducao com IPTG, a expressao da heparinase foi analisada por SDSPAGE A heparinase recombinante foi imobilizada em 'beads de glutationaSepharose. A atividade enzimatica da heparinase recombinante foi determinada por analises dos produtos obtidos apos a diGestão com heparinase asando' cromatografia em I papel Tetrassacarideo insaturado pentassulfatado e dissacarideo insaturado trissulfatado foram os produtos observados apos a diGestão com a heparinase recombinante acoplada a resina de Glutationa Sepharose O extrato bruto obtido da, BL21 tambem apresentou atividade especifica de heparinase Esta nova tecnologia possibilita o uso do extrato bruto da BL21 e umas producao da heparinase em larga escala, sem outras liases contaminantes. Outra vantagem e o fato de que esta metodologia e rapida, comparando com a purificacao bioquimica da heparinase a partir do extrato bruto da Flavobacterium heparinum pt
dc.format.extent 88 p.
dc.language.iso por
dc.publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rights Acesso restrito
dc.subject Glicosaminoglicanas pt
dc.subject Heparina pt
dc.subject Heparina Liase pt
dc.subject Flavobacterium pt
dc.title Clonagem, obtencao e caracterizacao de heparinase recombinante pt
dc.title.alternative Cloning, obtainment and characterization of recombinant heparinase en
dc.type Dissertação de mestrado
dc.identifier.file epm-11495.pdf
dc.description.source BV UNIFESP: Teses e dissertações
unifesp.campus Universidade Federal de São Paulo, Escola Paulista de Medicina pt



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