Purificacao e caracterizacao das aminopeptidases de cotiledones de Phaseolus vulgaris em germinacao

Purificacao e caracterizacao das aminopeptidases de cotiledones de Phaseolus vulgaris em germinacao

Título alternativo Purification and characterization of aminopeptidases from Phaseolus vulgaris cotyledon in germination
Autor Takeda, Lincoln Haruki Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo As aminopeptidases sao encontradas tanto no reino animal como no vegetal e hidrolisam ligacoes peptidicas na porcao amino-terminal de proteinas e peptideos, alem de hidrolisar aminoacil--naftilaminas e aminoacil-p-nitroanilinas. Das diferentes partes da planta a folha e a que apresenta maior atividade minopeptidasica por grama. Do extrato bruto de cotiledone de Phaseolus vulgaris, apos 7 dias de germinacao, foram purificadas, por cromatografia de troca ionica, de interacao hidrofobica e gel filtracao, tres aminopeptidases distintas. Da cromatografia de troca ionica, equilibrada com tampao fosfato de sodio 0,02M pH 7,0, foi eluido, com gradiente linear de fosfato de sodio 0,02 a 0,3 M pH 7,0, um unico pico de atividade em condutancia 710 S. Na cromatografia de interacao hidrofobica em coluna de Octyl-Sepharose Fast Flow, equilibrada e lavada com tampao fosfato de sodio 0,02M/ 3M KCl pH 7,0 e eluida com gradiente linear de KCl 3,0 a 0 M seguida de eluicao com agua e a seguir com isopropanol 50 por cento, foram eluidos tres picos proteicos com atividade: P1 (15,0 S), P2 (10,5 S) e P3 (0,95 S). A gel filtracao dessas aminopeptidases, em colunas de Superdex-75 para P1 e P2 e em Superdex-200 para P3, equilibradas e eluidas em PBS, apresentou, em cada cromatografia, apenas um pico proteico com atividade sobre AA-NA. SDS-PAGE, em presenca e ausencia de redutor, apresentou apenas uma banda proteica, com massas moleculares de 31,9 KDa, 63,7 KDa e 34,0 KDa para P1, P2 e P3 respectivamente. A aminopeptidase P1 age somente sobre Leu- e Met-NA com efiCiência cataliticaa(au)
Palavra-chave Phaseolus nanus
Germinação
Cotilédone
Enzimas
Endopeptidases
Aminopeptidases/isolamento & purificação
Idioma Português
Data de publicação 2003
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2003. 88 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 88 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Dissertação de mestrado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/19703

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