Título alternativo | Comparative analysis of cell signaling mediated by angiotensin II AT1 receptors in chinese hamster ovary cells and aortic smooth muscle cells |
Autor |
Franca, Lucimar Pereira de
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Orientador |
Shimuta, Suma Imura
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Resumo | Objetivos: Testou-se a hipotese de que as regioes nao codificadoras do gene do receptor AT, da angiotensina II mediaria a funcao do receptor AT, afetando o mecanismo de taquifilaxia. Investigou-se tambem o efeito da Ali, extracelular e intracelularmente administrada, sobre a redistribuicao dos ions Na+, Ca 2+ e producao de mensageiros secundarios em celulas de musculo liso da aorta de coelho em cultura primaria e transformadas espontaneamente e em celulas de ovario de hamster chines transfectadas com o receptor ATA (CHO-AT,). Metodos: Transfeccao das celulas, inicialmente, com o cDNA contendo somente a regiao codificadora do gene, e posteriormente com diferentes extensoes das regioes 3' e 5' nao codificadoras. Foram utilizadas celulas CHO, que nao contem o receptor AT, em contraste com as celulas do musculo liso que expressam endogenamente . Fez-se tambem, a co-transfeccao do cDNA do trocador Na+/Ca2+ em celulas CHO-ATi, para estudos comparativos com as celulas de musculo liso que o possuem de forma endogena. Enfocou-se tambem, o papel das organelas como o nucleo, a mitocondria e o reticulo endoplasmatico/sarcoplasmatico na sinalizacao de Ca 2+ por acao da Ali. Os estudos foram realizados apoiados nas tecnicas de imunocitoquimica, biologia molecular, dosagens bioquimicas, microfluorimetria, microinjecao, microscopia de fluorescencia confocal e de alta resolucao. Conclusoes: O receptor AT, recombinante, contendo a regiao 3' nao codificadora, preveniu a taquifilaxia para a captacao de Ca 2' em resposta a Lys2All, sugerindo que esta regiao estaria envolvida neste fenomeno. A analise das imagens de fluorescencia obtidas de ions Na+ e Ca2+, mostrou que a presenca do trocador Na+/Ca2+ influiu na distribuicao das concentracoes intracelulares de Na' e Ca 2+nas celulas CHO-ATi. A resposta ao Ca 2' bem como as oscilacoes de Ca 21 induzidas nessas celulas pela acao da Ali mostraram alta dependencia ao Ca 2+ extracelular enquanto nas celulas do musculo liso, somente as oscilacoes de Ca 2+ foram dependentes do Ca 2+ extracelular. A observacao de que a Ali microinjetada no nucleo induziu aumentos na concentracao do Ca 2+ indicou que os receptores para a Ali presentes no nucleo foram ativados e produziram IP3, responsavel pelo aumento no Ca 2+ nuclear. Conclui-se que a Ali extracelular internalizada ou a de origem intracelular pode interagir com o receptor nuclear e sinalizar o seu efeito mitogenico |
Palavra-chave |
Trocador de Sódio e Cálcio
Microscopia Confocal |
Idioma | Português |
Data de publicação | 2003 |
Publicado em | São Paulo: [s.n.], 2003. 176 p. |
Publicador | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
Extensão | 176 p. |
Direito de acesso | Acesso restrito |
Tipo | Tese de doutorado |
Endereço permanente | http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/19652 |
Arquivo | Tamanho | Formato | Visualização |
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