Gp70 de Paracoccidioides brasiliensis

Abstract

Objetivo: Producao de anticorpos monoclonais (MAbs) contra glicoproteina de 70 kDa de Paracoccidioides brasifiensis, com o intuito de isolar a molecula do extrato do fungo total para investigar o seu possivel papel biologico na patogenese da Paracoccidioidomicose. Metodos: Anticorpos monoclonais foram produzidos por fusao de celulas de mieloma com esplenocitos de animais imunizados, primeiramente com a banda de 70 kDa inserida em gel de SDS-PAGE e posteriormente com a propria glicoproteina purificada. A purificacao da molecula ocorreu por cromatografia de afinidade usando os MAbs produzidos. A funcao biologica da gp70 foi analisada em macrofagos peritoneais tanto pela influencia na sua habilidade fagocitica quanto na liberacao de oxido nitrico (NO) e peroxido de hidrogenio (H202). Alem disso, testou-se o efeito da imunizacao passiva dos MAbs anti-gp70 em camundongos infectados com P. brasifensis. Os resultados foram analisados por histologia e contagem de unidades formadoras de colonias no pulmao. Resultados: Em macrofagos peritoneais observou-se que a gp70 purificada inibe sua atividade fagocitica tanto por receptor de manose quanto de Fc. Tambem foi detectada a inibicao da liberacao de intermediarios reativos de nitrogenio (NO) e oxigenio (H202) por estas celulas. Ja o tratamento, com os MAbs anti-gp70, mostrou a ausencia total da formacao de granulomas no pulmao. Conclusao: Diante dos efeitos obtidos com macrofagos peritoneais pode-se supor que a gp70 age como mecanismo de escape na instalacao do fungo no inicio da infeccao. O ensaio de imunizacao passiva demonstrou o efeito protetor dos MAbs antigp70, que impediram a instalacao primaria do fungo e consequentemente a progressao da Paracoccidioidomicose