BbCI, inibidor de cruzipaína de Bauhinia bauhinioides: isolamento do cDNA e expressão heteróloga

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dc.contributor.advisor Sampaio, Misako Uemura [UNIFESP]
dc.contributor.author Hansen, Daiane [UNIFESP]
dc.date.accessioned 2015-12-06T23:03:11Z
dc.date.available 2015-12-06T23:03:11Z
dc.date.issued 2004
dc.identifier.citation São Paulo: [s.n.], 2004. 91 p.
dc.identifier.uri http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18804
dc.description.abstract O BbCI (Bauhinia bauhinioides Cruzipain Inhibitor) e um inibidor de cisteinoproteinase que mostra alta identidade sequencial com inibidores de planta do tipo Kunitz, porem nao apresenta nenhum residuo de cisteina. A inibicao da cruzipaina faz do BbCI um instrumento biotecnologico interessante no desenvolvimento de uma nova geracao de drogas para o combate a infeccoes causadas pelo Trypanossoma crua 0 BbCI tambem apresenta uma atividade inibitoria para HNE (Human Neutrophillus Elastase) enzima envolvida em varios processos fisiopatologicos. 0 gene codificante para BbCI foi clonado por RT-PCR usando oligonucleotideos degenerados, os quais foram sintetizados a partir da sequencia proteica previamente descrita. 0 produto amplificado foi inserido no vetor pGEM-T para sequenciamento. Uma vez confirmada a sequencia, oligonucleotideos internos foram sintetizados para a realizacao do RACE 5' e 3'(Rapid Amplification of cDNA Ends). A informacao gerada mostrou que o BbCI e inicialmente sintetizado como uma pre-pro-proteina apresentando a seguinte estrutura: 19 residuos de aminoacidos na regiao N-terminal, 164 residuos correspondentes a proteina nativa e 10 residuos na regiao C-terminal. A sequencia correspondente a cadeia madura foi subclonada no vetor de expressao pET-28a (Novagen). 0 BbCI foi produzido por expressao heterologa fusionado a uma sequencia de 6 residuos de histidinas com um sitio de clivagem de trombina entre eles. A expressao em E. coli BL21 (DE3) produziu o inibidor em grande escala o qual foi purificado por cromatografia de afinidade em resina Ni-NTA SuperFlow. A proteina de fusao foi submetida a clivagem com trombina e posteriormente purificada em gel filtracao Superdex 75a(au) pt
dc.format.extent 91 p.
dc.language.iso por
dc.publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rights Acesso restrito
dc.subject Inibidores de proteases pt
dc.subject Cisteína endopeptidases pt
dc.subject Clonagem molecular pt
dc.subject Bauhinia pt
dc.title BbCI, inibidor de cruzipaína de Bauhinia bauhinioides: isolamento do cDNA e expressão heteróloga pt
dc.title.alternative BbCI, a cruzipain inhibitor of the Bauhinia baujinoides: isolation of it's cDNA an heterrologous expression en
dc.type Dissertação de mestrado
dc.identifier.file epm-019598.pdf
dc.description.source BV UNIFESP: Teses e dissertações
unifesp.campus São Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM) pt



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