Estudo da atividade carboxipeptidasica da catepsina B utilizando bibliotecas combinatorias de peptideos com supressao intramolecular de fluorescencia

Estudo da atividade carboxipeptidasica da catepsina B utilizando bibliotecas combinatorias de peptideos com supressao intramolecular de fluorescencia

Alternative title Positional-scanning synthetic combinatorial library for cathepsin B carboxypeptidase specificity analysis
Author Cotrin, Simone Silva Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Carmona, Adriana Karaoglanovic Autor UNIFESP Google Scholar
Abstract Usamos bibliotecas combinatorias de peptideos com supressao intramolecular de fluorescencia para estudar a atividade carboxidipeptidasica da catepsina B. Mapeamos a especificidade dos subsitios S3, S2, S1 e S'1. Para definir a especificidade do subsitio S1 foi sintetizada uma primeira biblioteca com estrutura geral Abz-GXXZXK(Dnp)-OH (Abz=acido orto-amino benzoico; Dnp=2,4-dinitofenil; Z=aminoacido natural fixado na posicao, X=mistura de aminoacidos naturais incorporados randomicamente). Os resultados mostraram que este subsitio tem ampla especificidade podendo acomodar aminoacidos de diferentes classes como Arg, Phe, Leu, Ser, Gly. A especificidade dos subsitios S'1, S2 e S3 foi ensaiada com Abz-GXXRZK(Dnp)-OH, Abz-GXZRXK(Dnp)-OH e Abz-GZXRXK(Dnp)-OH, respectivamente. Nestas sub-bibliotecas, um residuo de Arg foi fixado na posicao P1 por ser o aminoacido mais susceptivel a hidrolise e para facilitar a solubilizacao dos peptideos. Os resultados mostraram que o subsitio Sz da catepsina B tem preferencia por peptideos contendo Val e Phe em P2. Em relacao ao subsitio S3 ficou demonstrada uma clara preferencia por lle, sendo Lys e Phe tambem bem aceitos. O subsitio S'1 apresentou especificidade menos definida acomodando diferentes classes de aminoacidos. Com base nos resultados das bibliotecas sintetizamos o peptideo Abz-GIVRAK(Dnp)-OH que contem os residuos mais favoraveis nas posicoes P3, P2, P1 e P'1. Este peptideo foi hidrolisado pela catepsina B com alta efiCiência catalitica (kcat/Km= 7288 mM-1 s-1). A ligacao clivada foi Arg-Ala como demonstrado por HPLC e pela espectroscopia de massa. Alem disso, Abz-GIVRAK(Dnp)-OH mostrou ser um substrato altamente seletivo para a catepsina B sendo praticamente resistente a hidrolise por outras cisteino-peptidases lisossomais como as catepsinas L, V e K
Keywords Substratos
Fluorescência
Biblioteca de Peptídeos
Language Portuguese
Date 2004
Published in São Paulo: [s.n.], 2004. 75 p.
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 75 p.
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18786

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