Sintese, atividade e estudos conformancionais de analogos da gomesina

Sintese, atividade e estudos conformancionais de analogos da gomesina

Título alternativo Synthesis, activity and conphormational study of gomesin analags
Autor Moraes, Luis Guilherme Mello de Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo O peptideo antimicrobiano gomesina (Gm), isolado de hemocitos da aranha caranguejeira Acanthoscurria gomesiana, e muito eficiente contra varios microorganismos patogenicos. A molecula (pGlu-CRRLCYKQRCVTYCRGR-NH2) contem quatro residuos de cisteina que formam duas pontes dissulfeto intramoleculares nas posicoes 2/15 e 6/11. Para estudar sua interacao com as membranas dos microorganismos, examinou-se o comportamento conformacional de alguns analogos em diferentes ambientes (SDS, LPC ou TFE) que mimetizam a interface membrana biologica/agua. Os analogos foram sintetizados pelo metodo da fase solida empregando a resina MBAR ou BAR e foram purificados por CLAE de fase reversa. Os peptideos purificados foram caracterizados por AAA e CL-MS. As atividades antimicrobianas foram avaliadas por um ensaio de inibicao de crescimento liquido contra Candida albicans, Bacillus megaterium e Escherichia coli e as atividades hemoliticas utilizando-se hemacias humanas. Os estudos conformacionais por RPE foram realizados com analogos marcados com a sonda paramagnetica TOAC {[TOAC1]-Gm e [TOAC1, Ser2,6,11,15]-Gm} e os de fluorescencia com os analogos contendo triptofano {[Trp7]-Gm, [Trp9]-Gm, [Ser2,6,11,15 Trp7]-Gm e [Ser2,6,11,15 Trp9]-Gm}. As conformacoes dos analogos foram comparadas com a da gomesina por dicroismo circular. A partir dos resultados dos estudos acima, concluiu-se que: 1) a incorporacao do TOAC ou a troca da Tyr7 ou da Gln9 pelo Trp nao acarretaram uma reducao consideravel nas atividades antimicrobianas e hemoliticas dos analogos ciclicos {[TOAC1]-Gm; [TOAC1, Ser2,6,11,15]-Gm; [Trp7]-Gm e [Trp9]-Gm} quando comparados com a gomesina. Por outro lado, a remocao das pontes dissulfeto levou a um acentuado decrescimo na atividade antimicrobiana dos analogos lineares {[Ser2,6,11,15,Trp7]-Gm e [Ser2,6,11,15,Trp9]-Gm}, demonstrando a importancia dessas pontes na manutencao da atividade; 2) os analogos ciclicos apresentaram, em todos os ambientes testados, uma conformacao do tipo -hairpin como a da gomesina nativa. Ja os analogos lineares apresentaram conformacoes desordenadas em LPC e uma estruturacao em -hairpin nos ensaios com SDS. 3) todos os analogos interagiram fortemente com SDS, mas nao com LPC, e estes resultados estao de acordo com os da literatura, que descrevem que o primeiro passo da acao dos peptideos antimicrobianos cationicos e a interacao eletrostatica com os componentes negativamente carregados da membrana do patogeno, levando a um posterior rompimento da membrana interna dos microorganismos
Palavra-chave Peptídeos
Biossíntese Peptídica
Idioma Português
Data de publicação 2004
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2004. 159 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 159 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Dissertação de mestrado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18747

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