Transfecção com oncogene EJ-ras afeta adesão, migração, ciclo celular e expressão do proteoglicano de heparam sulfato (sindecam-4) de células endoteliais

Transfecção com oncogene EJ-ras afeta adesão, migração, ciclo celular e expressão do proteoglicano de heparam sulfato (sindecam-4) de células endoteliais

Título alternativo The transfected with the EJ-ras oncogene dysplay morphological changes, much higher expression of the Ras oncogene and deregulation of cell cicle, becoming mopre densely populated and serum-independent
Autor Azevedo, Carla Cristina Lopes de Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Nader, Helena Bonciani Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo Celulas endoteliais de aorta de coelho (EC) foram transfectadas com o oncogene EJ-ras (EJ-ras-EC). As celulas transfectadas apresentam mudancas morfologicas, alta expressao do oncogene Ras, descontrole do ciclo celular, formam multicamadas e sao independentes de fatores do soro. Soro fetal bovino (SFB) e PMA (12-miristato 13-acetato de forbol) especificamente, estimulam a sintese do proteoglicano de heparam sulfato, sindecam-4, em celulas endoteliais de aorta de coelho (EC). Este efeito nao e observado em EJ-ras-EC. A cinetica de entrada da celula na fase S foi determinada pela sintese de DNA ([3H]-timidina e incorporacao de BrdU) e citometria de fluxo. O efeito mitogenico do SFB foi abolido por PMA nas celulas selvagens e PMA causa um bloqueio do ciclo celular na fase G1. Alem disso, o ciclo celular de EJ-ras-EC nao foi afetado pela adicao de FCS ou PMA. Usando um anticorpo monoclonal especifico para a sequencia N-terminal do core proteico do sindecam-4, foi demonstrado que celulas transfectadas com EJras apresentam um aumento na expressao de sindecam-4 (proteoglicano de heparam sulfato). O aumento e observado tanto para o proteoglicano presente nas celulas, como para o secretado para o meio de cultura. Analises estruturais nas cadeias de heparam sulfato usando heparitinases mostraram uma notavel diminuicao na O-sulfatacao na regiao do polimero contendo acido iduronico. Analise da expressao do core proteico do sindecam-4, epimerase e diferentes sulfotransferases por RT-PCR confirmam estes resultados. Transfeccao com EJ-ras leva a um aumento na sintese de heparam sulfato com uma diminuicao da sulfatacao, similar aos dados encontrados em tumores humanos e transformacao neoplasica. A sintese de acido hialuronico (AH) e tambem estimulada em celulas transfectadas com o oncogene Ej-ras. Celulas EJ-ras-EC retem pouca quantidade de AH nas celulas quando comparadas com as celulas selvagens(4 por cento e 26 por cento, respectivamente). Adesao e migracao celular na presenca de diferentes proteinas da matriz extracelular(fibronectina, FN; laminina, LN; colageno tipo I, Col I e colageno tipo IV, Col IV) foram tambem investigadas. Celulas transfectadas com oncogene EJ-ras aderem menos quando comparadas com as celulas selvagens, exceto para FN. Usando PD 98059, um inibidor de MAPKK, foi observado um aumento da adesao em colagenos
Assunto Oncogenes
Ciclo celular
Proteoglicanas de heparan sulfato
Idioma Português
Data 2004
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2004. 150 p.
Editor Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 150 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18699

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