Acao de BbKI e peptideos relacionados a sua estrutura em fungos e bacterias patogenicas

Acao de BbKI e peptideos relacionados a sua estrutura em fungos e bacterias patogenicas

Título alternativo The effects of BbKI and peptides related to its structure on both pathogens yeast and bacteria
Autor De Caroli, Fernanda Peruzzo Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo BbKI, inibidor de calicreina plasmatica humana de Bauhinia bauhinioides, apos extracao com solucao de NaCl 0,15M, foi purificado por fracionamento por sulfato de amonio, cromatografia de afinidade em coluna Con A Sepharose 4B (nao adsorvido), cromatografia de troca ionica DEAE-Sephadex A-50, HiTrap Q (sistema FPLC) e cromatografia de afinidade em coluna de tripsina-Sepharose. A analise da homogeneidade foi realizada em cromatografia de fase reversa em coluna C1$ (sistema HPLC), com gradiente de acetonitrila em 0,1 por cento de TFA. A sequecia N-terminal, de 25 residuos de aminoacidos, do BbKI apresentou a mesma sequencia primaria da proteina descrita anteriormente por Mendes,1998. Na determinacao do segmento N-terminal do BbKI, apos cromatografia de afinidade em coluna de tripsina-Sepharose, pode-se verificar e que a Arg na posicao 63 e o residuo de aminoacido da posicao P1 do sitio reativo. Eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida do inibidor mostra uma cadeia polipeptidica unica de massa molecular em torno de 20 kDa que nao apresenta mudancas apos reducao com 2-mercaptoetanol. A dimerizacao do BbKI foi confirmada por filtracao em gel em coluna Superdex 200 (sistema FPLC). A estrutura secundaria do BbK, por espectro (CD) apresentou 44 por cento de a-helice, 29 por cento de b-folha, 7 por cento de b-volta e 18 por cento de desordenada. O espectro tambem indicou a formacao de pontes dissulfeto. A inibicao de tripsina por BbKI ocorreu na razao molar 1:1 (enzima/inibidor)e confirmada pela curva de inibicao ajustada por um programa de comutador usando os valores experimentais indicados. A constante de dissociacao foi calculada como _20 nM. A atividade inibitoria tambem foi determinada para calicreina plasmatica humana (Ki = 4,7 nM) e a estequiometria da reacao foi de 2:1 (enzima/inibidor). A cidade inibitoria foi determinada para calicreina pancreatica de porco (Ki = 0,2 mM). Elastase pancreatica de porco nao foi afetada pelo inibidor. A acao inibitoria de BbKI sobre HuPK foi confirmada por radioimunoensaio. BbKI inibiu 69 por cento da atividade da HuPK na hidrolise do substrato natural o cininogenio humano de alta massa molecular. BbKI tambem inibiu a fracao enzimatica S-68 de Paracoccidioidoides brasiliensis sobre o cininogenio...(au)
Palavra-chave Inibidores de Proteases
Calicreínas
Fungos
Bactérias
Idioma Português
Data de publicação 2003
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2003. 130 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 130 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Dissertação de mestrado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18626

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