Estudo do processamento da glicoproteina de superficie de 82kDa(GP82) de tripomastigotas metaciclicas de Trypanosoma cruzi

Estudo do processamento da glicoproteina de superficie de 82kDa(GP82) de tripomastigotas metaciclicas de Trypanosoma cruzi

Título alternativo Study on the processing of the surface glycoprotein of 82 kDa(GP82) from metacyclic trypomastigotes of Trypanosoma cruzi
Autor Cordero Veas, Esteban Mauricio Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo Os tripomastigotas metaciclicos de Trypanosoma cruzi sintetizam uma glicoproteina de superficie estagio-especifica de 82 kDa (GP82) que esta envolvida na entrada do parasita nas celulas hospedeiras. A GP82 encontra-se ligada a superficie celular por uma ancora de glicosilfosfatidilinositol (GPI). As proteinas ligadas por GPI sao sintetizadas com uma extremidade C-terminal que e substituida por uma ancora GPI numa reacao de transamidacao que acontece pos-traducionalmente. A sequencia da GP82 que determina a adicao da ancora GPI contem 25 aminoacidos distribuidos no sitio w, seguindo-se uma sequencia espacadora (7 aminoacidos) e uma regiao mais hidrofobica (15 aminoacidos). O sitio w, reponsavel pela clivagem e adicao da ancora GPI, e composto por 3 aminoacidos: o aminoacido w ao qual a ancora GPI e tranferida, e Asp; o aminoacido w+1 e Gly e o aminoacido w+2 e Ser. Visando determinar experimentalmente a sequencia para ancoragem por GPI em T. cruzi, fizemos uma mutacao no putativo sitio de clivagem e adicao (sitio w) da ancora. Por meio de mutacao sitio-dirigida foi gerada uma substituicao do aminoacido no sitio w (posicao 492), onde o codon GAC foi trocado por TCC, assim o motivo de clivagem e adicao Asp-Gly-Ser presente na proteina nativa foi substituido por Ser-Gly-Ser. Para avaliar o processamento de uma proteina com sinal defectiva para adicao de GPI, geramos uma GP82 truncada, eliminando todo o sinal C-terminal incluindo-se o sitio c). As duas construcoes foram clonadas no vetor pTEX e inseridas em epimastigotas (cepa G) por meio de eletroporacao. A incorporacao do plasmidio foi confirmada por analise de Southern blot apos diGestão com Xho I, e a transcricao dos genes transfectados por analise de northem blot. A traducao dos genes exogenos foi analisada por western blot empregando um anticorpo monoclonal especifico para GP82 (MAb-3F6), e a localizacao celular dos produtos traduzidos foi feita por imunofluorescencia e...(au)
Palavra-chave Trypanosoma cruzi
Glicoproteínas de Membrana
Glicosilfosfatidilinositóis
Transfecção
Idioma Português
Data de publicação 2002
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2002. 83 p. ilus.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 83 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Dissertação de mestrado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18256

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