Estudos moleculares de inibidores de serinoproteases das larvas do carrapato Boophilus microplus

Estudos moleculares de inibidores de serinoproteases das larvas do carrapato Boophilus microplus

Título alternativo Molecular studies of serine protease inhibitors from cattle tick Boophilus microplus(larvae)
Autor Sasaki, Sergio Daishi Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Tanaka, Aparecida Sadae Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo A partir de extratos de larvas e ovos do carrapato Boophilus microplus foram purificados inibidores de serinoproteases (BmTIs) utilizando cromatografia de afinidade em tripsina-Sepharose. Os BmTIs apresentaram massas moleculares entre 6,2 kDa e 18,4 kDa e atividade inibitoria sobre tripsina, HuPK (calicreina plasmatica humana) e elastase de neutrofilos. Utilizando cromatografia de troca-ionica coluna Resource Q, os BmTls foram separados nas formas proteicas denominadas BmTI-A, BmTI-B, BmTI-C, BmTI-D, BmTI-E e BmTI-F. O material nao-retido na cromatografia em coluna Resource Q foi separado em coluna Mono S obtendo-se as formas BmTI-1, BmTI-2, BmTI-3, BmTI-4 BmTI-5, BmTI-6 e BmTI-7. Todas as formas de BmTIs apresentaram atividade inibitoria sobre tripsina com constante de dissociacao (Ki) na ordem de nM. As formas BmTI-A, BmTI-D, BmTI-2, BmTI-3 e BmTI-4, inibem elastase de neutrofilos e HuPK com Ki na ordem de nM. O BmTI-D mostrou ser o melhor inibidor de HuPK e o BmTI-4 mais eficiente para elastase de neutrofilos, com constantes de dissociacao (Ki) de 11,6 nM e 0,2 nM, respectivamente. As formas BmTI-A, BmTI-D, BmTI-2, BmTI-3, BmTI-4 e BmTI6 tiveram as porcoes N-terminais determinadas por sequenciamento automatico de aminoacidos, estas sequencias parciais permitiram a classificacao destes BmTIs dentro da familia dos inibidores de serinoproteases tipo Kunitz de tecido animal. Os BmTIs pos tripsina-Sepharose foram utilizados na imunizacao de bovinos, mostrando acao imunogenica (producao de anticorpos anti-BmTIs) e protetora contra a infestacao por esta especie de carrapato. Na tentativa de clonar o gene de um BmTI foram utilizadas duas estrategias de clonagem baseadas na sintese do cDNA a partir do RNA mensageiro de larvas do carrapato 8. microplus. 1) A construcao de uma biblioteca de...(au)
Palavra-chave Inibidores de serino proteinase
Carrapatos
Idioma Português
Data de publicação 2002
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2002. 125 p. ilustab.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 125 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Dissertação de mestrado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18033

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