Seleção in vitro de aptameros de RNA resistente a nucleases que possuem afinidade pelo receptor B1 de cininas

Seleção in vitro de aptameros de RNA resistente a nucleases que possuem afinidade pelo receptor B1 de cininas

Título alternativo Identification of non-peptidergic antagonists of kinin B1 receptor
Autor Martins, Antonio Henrique Baccin Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Pesquero, João Bosco Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo O objetivo do presente trabalho e a identificacao de antagonistas nao-peptidicos para o receptor B1 de cininas. Como o receptor e essencialmente expresso durante condicoes patologicas como inflamacao, trauma e por meio da presenca de lipopolissacarideos de bacterias a geracao de inibidores estaveis que possuam alta afinidade, poderao inibir a atividade dos processos inflamatorios dependentes do receptor 131. Uma biblioteca combinatoria denominada tecnica SELEX (Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment) foi usada para selecionar aptameros de RNA resistentes a nuclease que ligam-se a receptores 131 recombinantes de rato expressos em membranas de celulas CHO. Os aptameros sao deslocadas pelo antagonista Lys-des-Arg9-Leu8-bradicinina. Lys-des-Arg9-Leus-bradicinina deslocou o RNA e este foi amplificado por seis ciclos repetitivos utilizando as tecnicas RT-PCR e novamente transcritos in vitro na presenca de bases estaveis modificadas com fluor. O pool randomico original contendo cerca de 1013 sequencias diferentes e possiveis estruturas terciarias, foi selecionado no decorrer dos ciclos pois liga-se as membranas enriquecidas com o receptor 131 e diminuicao sua ligacao quando exposto a proteina digerida, como revela a analise do gel shift. Os RNAs marcados do ciclo 6 do metodo SELEX ligaram-se a proteinas de 38 KDa (de acordo com a massa molecular do receptor 131), esta ligacao nao estava presente em celulas nao transfectadas. Estes resultados confirmam observacoes previas de que oligonucleotideos isolados de pools randomicos reconhecem seus alvos com a mesma especificidade de anticorpos. Os procedimentos de SELEX serao repetidos e os aptameros de RNA que ligam-se com alta afinidade a proteina do receptor 1311 isolados. As sequencias individuais serao identificadas por colagem, sequenciadas e suas propriedades farmacologicas testadas in vivo e in vitro. Em vista da importancia do receptor B1 de cininas em doencas inflamatorias e atendo-se a alta homologia entre receptores B1 de rato e humanos, aptameros biologicamente estaveis podem se tornar importantes ferramentas para aplicacoes terapeuticas
Palavra-chave RNA
Cininas
Idioma Português
Data de publicação 2002
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2002. 77 p. ilus.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 77 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Dissertação de mestrado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/17885

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