Obtenção de embriões transgênicos pela técnica de microinjeção pronuclear

Abstract

Novas metodologias passaram a ser empregadas' para) o estudo) e compreensao dos sistemas biológicos devido aos avanços das técnicas e recursos provenientes da biologia molecular e celular e da engenharia genética. Assim foram desenvolvidos modelos transgênicos que representam atualmente uma das mais promissoras tecnologias dentro da área biotecnológica, tanto para fins comerciais, como para diversas áreas dentro da pesquisa básica No presente estudo, desenvolvemos a técnica de microinjeçao pronuclear para a injeçao de DNA exógeno no pronúcleo de oócito de camundongo! O DNA que foi microinjetado pela técnica de microinjeçao pronuclear contém o promotor da metalotioneína (MT) acoplado ao gene estrutural da a-galactosidase de Escherichià coli. Este transgene fornece meios para estudar o controle espacial e temporal tecido específico de um gene. Os embrioes microinjetados foram marcados com o substrato X-gal, que permite a visualizaçao direta da atividade do gene da enzima lac-Z e a caracterizaçao da distribuiçao da atividade em estágios de preimplantaçao. Utilizando ensaio histoquímico com este substrato foi possível a visualizaçao da expressao da atividade exógena da a-galactosidase em oócitos em estágio de duas células Os resultados indicam que o laboratório possui condiçoes de manutençao e equipamento para gerar um animal transgênico com o uso da técnica de microinjeçao pronuclear.