Purificação, clonagem, expressão e caracterização molecular de inibidores de serinoproteases presentes em Triatoma infestans, vetor da doença de Chagas

Purificação, clonagem, expressão e caracterização molecular de inibidores de serinoproteases presentes em Triatoma infestans, vetor da doença de Chagas

Alternative title Purification, cloning, expression and characterization of serine protease inhibitors present in Triatoma infestans, a Chagas' disease vector
Author Campos, Ivan Torres Nicolau de Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Tanaka, Aparecida Sadae Autor UNIFESP Google Scholar
Abstract Animais hematofagos possuem necessidade vital em manter o sangue de seus hospedeiros fluido, tanto na aquisicao como no armazenamento e diGestão do produto alimentar. Para tal, esses animais desenvolveram ao longo de seus processos evolutivos mecanismos para interferir na hemostasia dos seus hospedeiros. Neste trabalho foi purificado um inibidor de trombina (infestina) presente no estomago do barbeiro Triatoma infestans. A infestina apresentou massa molecular de aproximadamente 13 kDa, em SDS-PAGE, inibindo trombina e tripsina com Ki de 43 pM e 2 nM, respectivamente. A sequencia de aminoacidos da regiao N-terminal e de um peptideo interno permitiram a classificacao da infestina como um inibidor de serinoproteases da familia tipo-Kazal. Baseado em estudos anteriores e na sequencia de aminoacidos da proteina nativa, foi possivel clonar o gene da infestina. Curiosamente o gene da infestina traduziu para uma proteina composta por 4 dominios do tipo-Kazal, mas a proteina purificada correspondeu apenas aos dois primeiros dominios. Realizou-se a clonagem e expressao em leveduras S. cerevisiae do gene obtido (infestina 1-4) bem como as variantes correspondentes aos dois primeiros dominios (infestina 1-2) e aos dois ultimos (infestina 3-4). As infestinas recombinantes foram purificadas e caracterizadas, apresentando atividades inibitorias distintas. A r-infestina 1-2 apresentou atividades inibitorias similares a infestina nativa, inibindo trombina e tripsina com K de 25 pM e 3 nM, respectivamente. A r-infestina 1-4 inibiu trombina (0,8 nM), tripsina (5 nM), fator Xa (60 nM), plasmina (1 nM) e fator XIla (78 pM). A infestina 3-4 inibiu tripsina (2 nM), plasmina (0,37 nM), fator Xa(17 nM) e fator XIla (45 pM)
Keywords Triatoma
Inibidores de Serino Proteinase
Inibidores de Proteases
Triatominae
Coagulação Sanguínea
Language Portuguese
Date 2001
Published in São Paulo: [s.n.], 2001. 86 p. ilus. , tab.
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 86 p.
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/17342

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