Estudo da ligação e internalização do lipopolissacarídeo e indução de ativação celular, avaliada individualmente em sangue total: interferência do ácido etilenodiaminoteraácetico (EDTA) e heparina

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dc.contributor.advisor Salomão, Reinaldo [UNIFESP]
dc.contributor.author Brunialti, Milena Karina Coló [UNIFESP]
dc.date.accessioned 2015-12-06T23:01:11Z
dc.date.available 2015-12-06T23:01:11Z
dc.date.issued 2000
dc.identifier.citation São Paulo: [s.n.], 2000. 66 p. ilustab.
dc.identifier.uri http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/17019
dc.description.abstract Varios trabalhos demonstraram que o monocito, quando estimulado pelo LPS, desempenha importante papel na resposta inflamatoria. Neste trabalho avaliamos a cinetica e dose-resposta de ligacao e internalizacao do LPS a monocitos, e da ativacao de subpopulacoes leucocitarias por expressao de mercadores de ativacao na superficie celular e deteccao de TNF-a intracelular induzidos pelo LPS, utilizando a citometria de fluxo, em sangue total. A influencia dos anticoagulantes, heparina e EDTA, tambem foram determinadas nas variaveis acima citadas. O sangue foi obtido de doadores sadios em tubo a vacuo contendo EDTA ou heparina. LPS conjugado a biotina (LPSB) foi usado para avaliar a ligacao e internalizacao do LPS as celulas em sangue total. Amostras sem LPS foram utilizadas como controle. Apos a incubacao, o sangue foi lavado e as hemacias lisadas. Posteriormente as celulas foram marcadas com CDl4-FITC, CD4PerCP, CD3-APC, CDl9-APC. A deteccao de LPSB foi feita pela adicao de estreptavidina-red670 ou estreptavidina-APC. Para verificar a expressao de mercadores de ativacao na superficie celular e citocina intracelular induzidos pelo LPS utilizaram-se CD69-FITC e HLA-DR-PE, e anticorpo anti-TNF-a humano-APC, respectivamente. A leitura dos resultados foi realizada em citometro de fluxo. As aquisicoes e analises foram realizadas no programa CellQuest. Para estabelecer a melhor dose de LPSB utilizaram-se diferentes concentracoes (O, 200, 1.000 e 5.000 ng/ml) incubando-as por uma hora. A dose de 5.000 ng/ml foi considerada ideal por apresentar 93 por cento dos monocitos ligados ao LPS. A especificidade do LPSB foi testada com pre incubacao de LPS nao marcado variando-se as doses (O, 5.000 e 20.000 ng/ml). Notou-se com 5.000 ng/ml um bloqueio de 99 por cento da ligacao do LPSB. Para verificar o tempo necessario de ligacao do LPSB ao monocito empregou-se tempos de incubacao de 5, 60, 120 e 240 minutos. O LPSB liga-se prontamente ja 5 minutos aos monocitos presentes em sangue total tanto em EDTA quanto em heparina. Nas amostras colhidas em EDTA observou-se uma diminuicao da deteccao desta ligacao a partir de 60 minutos de incubacao, nao sendo mais detectado em 240 minutos. Este fenomeno foi acompanhado por aumento da expressao de HLA-DR na superficie dos monocitos. Em contraste, a ligacao do LPSB a membrana mantem-se detectavel no sangue tratado com heparina numa proporcao muito maior de celulas. A adicao de ...(au) pt
dc.format.extent 66 p.
dc.language.iso por
dc.publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rights Acesso restrito
dc.subject Lipopolissacarídeos pt
dc.subject Ativação de macrófagos pt
dc.subject Anticoagulantes pt
dc.title Estudo da ligação e internalização do lipopolissacarídeo e indução de ativação celular, avaliada individualmente em sangue total: interferência do ácido etilenodiaminoteraácetico (EDTA) e heparina pt
dc.title.alternative Assessment of lipopolysaccharide binding, internalization, and cell activation, at single-cell level in whole blood: influence of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) and heparin en
dc.type Dissertação de mestrado
dc.identifier.file epm-016796.pdf
dc.description.source BV UNIFESP: Teses e dissertações
unifesp.campus São Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM) pt



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