Estrutura e propriedades de inibidores de serinoproteínases do tipo Bowman-Birk de sementes de Dioclea glabra e do tipo Kunitz de sementes de Bauhinia rufa

Estrutura e propriedades de inibidores de serinoproteínases do tipo Bowman-Birk de sementes de Dioclea glabra e do tipo Kunitz de sementes de Bauhinia rufa

Título alternativo Structure and proprieties of Bowman-Birk serine proteases inibitors from Dioclea glabra seeds and Kunitz serine proteases inhibitors from Bauhinia rufa
Autor Bueno, Norlene Regina Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Oliva, Maria Luiza Vilela Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo Dioclea glabra e uma leguminosa da subfamilia Papilionoideae, encontrada em todo o Brasil. A presenca, em suas sementes, de uma proteinase (dioclen) e de um especifico inibidor de tripsina, ja foi por nos previamente descrito (Bueno 1994). O inibidor foi purificado das sementes de Dioclea glabra por precipitacao por acetona, fracionamento em troca ionica e filtracao em gel. A estrutura primaria do inibidor, determinada por degradacao de Edman e espectrometria de massa, indicou que o inibidor de tripsina pertence a familia de inibidores Bowman-Birk, contem 67 residuos de aminoacidos e e o primeiro inibidor caracterizado e preparado da tribo Dioclea: SSGPCCDRCRCTKSEPPQCQCQDVRLNSCHSACEACVCSHSMPGLCSC LDITHFCHEPCKSSGDDED Embora o inibidor apresente dois sitios reativos determinados por clivagem especifica por tripsina (Lys 13 His4o), foi demonstrado que apenas o primeiro sitio, com Lys 13 em Pl, se mostrou efetivo. DgTI forma complexo 1:1 com tripsina, com constante de dissociacao Ki O,5 x lO-9 M; e nao foi observada inibicao para quimotripsina, calicreinas, plasmina e trombina. Apesar da alta especificidade para a tripsina, DgTI tambem inibiu a atividade proteolitica de Musca domestica (Diptera) e Tenebrio molitor (Coleoptera). As caracteristicas estruturais e inibitorias do DgTI nos permitem classifica-lo como o primeiro inibidor de Bowman-Birk tipo I descrito para dicotiledoneas. Dioclen e uma endoproteinase com massa molecular de aproximadamente 60 kDa e que criva Arg na posicao Pl. Embora sua acao dependa da presenca metais, as inibicoes por TPCK, TLCK e DFP permitem caracterizar a enzima tentativamente como membro da familia de serinoproteinases. Dioclen hidrolisa proteinas nativas das sementes de Dioclea glabra, inclusive o inibidor DgTI; n entanto, a enzima nao e afetada por esse inibidor. Neste trabalho tambem foram caracterizados 2 inibidores com massa molecular de aproximadamente 20 kDa, das sementes de Bauhinia rufa. A proteinas apresentaram diferentes especificidades para a inibicao das serinoproteinases. BrTI-l e BrTI-3 foram inibidores efetivos de tripsina, mas somente BrTI-3 apresentou atividade inibitoria tambem para fator Xa (Ki 3,5 nM) e calicreinas teciduais (Ki 1,5 nM e 19 nM), calicreina pancreatica de porco e urinaria humana, respectivamente. A sequencia de aminoacidos de BrTI-l foi parcialmente determinada. A proteina e formada por cadeia polipeptidica unica e nao apresenta residuo de cisteina. A sequencia apresenta alta ...(au)
Palavra-chave Inibidores de proteases
Sequência de aminoácidos
Serina proteases
Idioma Português
Data de publicação 1998
Publicado em São Paulo: [s.n.], 1998. 121 p. ilustab.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 121 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/16063

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