Avaliacao do tratamento ortopedico no mieloma multiplo

Abstract

Foi demonstrado em nosso laboratorio que celulas mesangials primarias em cultura sao capazes de expressarem mRNA para enzima conversara de angiotensina I (ECA). A ECA e produzida tanto na forma ligada a membrana como na forma soluvel, indicando um potente efeito local na producao de angiotensina II na nucrocirculacao glomerular. O objetivo deste estudo foi purificar e caracterizar as formas de ECA soluvel e ligada a membrana, bem como contida no compartimento intracelular, das celulas mesangiais em cultura. CM de rato Wistar (3º subcultivo) foram mantidas por 20 horas em RPMI sem soro fetal bovino. A seguir as celulas foram sedimentadas por centrifugacao, e o meio de cultura foi concentrado cerca de 29 vezes em um concentrador Amicon. Esse material foi submetido a gel filtracao em resina AcA-34, encontrando-se dois picos de atividade sobre HHL (ECA1; 130 kDa e ECA2; 60 kDa). Apos uma segunda etapa de gel filtracao (resina Superdex 200 HRlO/30) obtivemos duas preparacoes homogeneas (ECALA e ECA2a). As ECAs ligadas a membrana da CM foram extraidas por Triton X-114 e submetidas as mesmas etapas de purificacao descritas acima. Obtivemos tambem duas preparacoes homogeneas, ECAInt1A (l35 kDa) e ECAInt2A (68 kDa). A atividade das quatro enzimas sobre HHL foi inibida pelo captopril, enalapril e trandaloprflato (inibidores competitivos) e pelo EDTA (agente quelante). O valor de K. determinado para HHL foi da ordem de 10-3M para todas as enzimas. O pH otimo de acao sobre HHL foi de 8,0, para as enzimas soluveis, e de 7,5, para as enzimas ligadas a membrana. As quatro formas de enzima hidrolisam BK, AI, LHRH, Leu5-encefalina e des-Arg9-BK com a mesma especificidade descrita para as enzimas conversaras de angiotensina 1. Ambas formas de baixa massa molecular hidrolisam os substratos angiotensinal-7 e Nacetil-Ser-Asp-Lys-Pro, como descrito para ECA dominio N. Alem disso, a razao