Expressao de genes que codificam antigenos imunodominantes de TRypanosoma cruzi em bacterias recombinantes

Expressao de genes que codificam antigenos imunodominantes de TRypanosoma cruzi em bacterias recombinantes

Author Yamauchi, Lucy Megumi Autor UNIFESP Google Scholar
Abstract Utilizamos as tecnicas de DNA recombinante para expressar antigenos de T. cruzi com potencial diagnostico em bacterias recombinantes. Genes que codificam antigenos imunodominantes parasitarios (H49, JL7, JL8, A13 e B13) foram subclonados no vetor de expressao, plasmidio pGEX, e expressos como proteinas em fusao com a glutationa S-transferase. As proteinas recombinantes foram produzidas em larga escala e com grau de pureza aceitavel. Os antigenos recombinantes reagem especificamente em teste de ELISA com soros de pacientes chagasicos e nao apresentam reacao cruzada com soros de pacientes de outras doencas parasitarias. Nossos resultados sugerem que as proteinas recombinantes podem proporcionar a base para testes de diagnostico especificos para doenca de Chagas. O sistema de expressao glutationa S-transferase tambem foi utilizado para expressar antigenos de superficie estagio-especificos de formas tripomastigota de T. cruzi (gp90 e gp82). As proteinas recombinantes eram parcialmente insoluveis e nao puderam ser purificada eficientemente do extrato celular por cromatografia de afinidade. Desenvolvemos um protocolo para purificar as proteinas recombinantes de geis de poliacrilamida-SDS preparativos por eluicao com detergentes e tampoes apropriados. As proteinas recombinantes eluidas foram utilizadas em ensaios biologicos. Para identificar o dominio antigenico reconhecido pelo anticorpo monoclonal 3F6 dentro do antigeno de superficie gp82, um grupo de subfragmentos derivados do gene MTS-gp82 foi expresso como proteinas de fusao no sistema pGEX e analisadas em ensaios de owestern bloto com o anticorpo monoclonal 3F6. O dominio antigenico reconhecido pelo anticorpo monoclonal 3F6 foi mapeado em uma regiao de 200 aminoacidos localizada no dominio carboxi-terminal da gp82 (entre os aminoacidos 302-502). Nossos resultados indicam que o sistema de expressao bacteriana pGEX e apropriado para a producao de antigenos em grandes quantidades e qualidade. As proteinas recombinantes podem representar ferramentas valiosas para o diagnostico e estudos biologicos de parasitoses
Keywords Expressão Gênica
Bactérias
Trypanosoma cruzi
Language Portuguese
Date 1997
Published in São Paulo: [s.n.], 1997. 80 p.
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 80 p.
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/15178

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